Autores
C Calero Acuña, E Arellano Orden, A Cano Ruiz, JL López-Campos Bodineau
Introducción
La inflamación del aparato respiratorio en la enfermedad pulmonar obstructiva crónica (EPOC) ha sido extensamente estudiada durante las últimas décadas. Aún existen cuestiones relevantes sin respuesta como el origen de la inflamación sistémica. Por ello, nos planteamos analizar la respuesta in vitro de distintos tipos celulares pulmonares a la estimulación con citoquinas inflamatorias. Nuestro objetivo fue evaluar la respuesta de fibroblastos pulmonares humanos y células epiteliales bronquiales humanas a citoquinas inflamatorias.
Metodología
Se han empleado células epiteliales bronquiales (CRL-4011) y fibroblastos pulmonares humanos (MRC-5) procedentes de una línea comercial de la ATCC y EACC, respectivamente. Tras un estudio de dosis respuesta, se eligió la dosis de IL-1 (R&D System, Minneapolis MN) de 10ng/ml. Estas células se cultivaron con IL-1 durante 24, 48 y 72 horas. En cada uno de los puntos, se midió la viabilidad con trypan-blue, se recogió el sobrenadante para la determinación de proteínas mediante ELISA (R&D System, Minneapolis MN) y al pellet se le extrajo mediante un kit (Roche) para medir la expresión génica mediante RT-PCR.
Resultados
Tanto las células epiteliales como los fibroblastos responden a citoquinas inflamatorias (IL-1) aumentando la expresión de genes implicados en la inflamación pulmonar (IL-8, MCP-1, NF-?? e IFN-?), la inflamación sistémica (SAA1, SAA2, SAA4 y PCR) y en el desequilibrio proteasas/antiproteasas (MMP-9 y MMP-12), siendo esta respuesta mayor en los fibroblastos que en las células epiteliales (Tabla1). Tabla1. Expresión génica de células epiteliales y fibroblastos expresados en número de veces que se expresa más que el control. Células Epiteliales Fibroblastos IL-8 22,39 37373,6 MCP-1 4,24 54,49 NF-K? 1,9 4,5 IFN- ? 3,78 0 SAA1 1,53 1824,45 SAA2 5,17 26615,88 SAA4 1,39 382,3 PCR 3,02 2,9 MMP-9 10,02 26 MMP-12 2,03 0
Conclusiones
Tanto las células epiteliales como los fibroblastos, responden al estímulo de citoquinas inflamatorias, aumentando la expresión de genes implicados en las principales vías patogénicas de la EPOC.
