Autores
A. Díaz Baquero, E. Arellano Orden, F.J. Saenz Coronilla, M. Barrera Talavera, F. Rodríguez Panadero , J.A. Rodriguez Portal
Introducción
Otros grupos han demostrado previamente que el losartan (ARA II) inhibe la fibrosis pulmonar inducida por la bleomicina en ratones. El objetivo de este estudio fue confirmar que el losartan inhibía una línea celular de fibroblastos humanos, estimulados previamente con TGF-β1 in vitro.
Metodología
Células procedentes de una línea celular de fibroblastos (MRC5, de la European Collection of Cell Cultures) fueron estimuladas con diferentes dosis de TGF-β1, siendo seleccionadas finalmente las de 5 ng/mL y 10ng/mL. Posteriormente las tratamos con 5μM o 10 μM de losartan in vitro. Usamos como control un cultivo celular sin TGF-β1. El experimento fue repetido 6 veces. El sobrenadante fue alicuotado a las 24 y 48h después de añadir el TGF-β1 y el losartan al cultivo. Realizamos determinaciones de b-FGF por ELISA (R&D Systems, Minneapolis, MN) y de RNA por la técnica de Trizol (Invitrogen, Carlsbad, CA,USA). El análisis de la expresión génica de b-FGF fue realizado por PCR en tiempo real (MX3500, Stratagene , Cedar Creek, TX, USA). La viabilidad celular fue evaluada por análisis de proliferación (Cell Titer, Promega, Madison, WI) a las 48 horas.
Resultados
Los niveles de b-FGF fueron más elevados en las células estimuladas con TGF-β1 comparadas con células no tratadas. Encontramos una cantidad menor de b-FGF a las 24 y 48 horas cuando los cultivos fueron estimulados con TGF-β1 y después inhibidos con losartan, comparados con las células no inhibidas con losartan. Obtuvimos el nivel más bajo de b-FGF en el cultivo estimulado con 5ng/ml de TGF e inhibido con 10μM de losartan.
Conclusiones
El Losartan disminuye la producción de bFGF por los fibroblastos in vitro, y estos efectos son dosis y tiempo dependientes.
